Semua Mengenai Enzim Sekatan

Berapa banyak yang anda tahu tentang enzim sekatan? Dapatkan pemahaman yang lebih baik tentang apa yang mereka lakukan dan mengapa mereka penting, dengan kajian ini.

Penentuan Enzim Sekatan

Endonucleases sekatan adalah kelas enzim yang memotong molekul DNA. Setiap enzim mengiktiraf urutan unik nukleotida dalam helai DNA. Susunan tersebut biasanya sekitar 4 hingga 6 pasangan pasang panjang. Urutannya adalah palindromic dalam bahawa helai DNA percuma mempunyai urutan yang sama hanya dalam arah sebaliknya.

Dengan kata lain, kedua-dua helai DNA dipotong di lokasi yang sama.

Di mana Enzim Ini Ditemui

Enzim sekatan didapati dalam pelbagai jenis bakteria di mana peranan biologi mereka adalah untuk mengambil bahagian dalam pertahanan sel. Enzim-enzim ini "menyekat" DNA (asing) virus yang memasuki sel, dengan memusnahkannya. Sel hos mempunyai sistem pengubahsuaian larangan yang methylates DNA sendiri di tapak khusus untuk enzim sekatan masing-masing, dengan itu melindungi dari belahan. Lebih daripada 800 enzim yang diketahui telah mendapati bahawa mengiktiraf lebih daripada 100 urutan nukleotida yang berlainan.

Penggunaan dalam Bioteknologi

Enzim sekatan digunakan dalam bioteknologi untuk memangkas DNA menjadi helai yang lebih kecil untuk mengkaji perbezaan panjang fragmen di antara individu (Pembatasan Fragment Length Polymophism - RFLP). Mereka juga digunakan untuk pengklonan gen.

Teknik RFLP telah digunakan untuk menentukan bahawa individu atau kumpulan individu mempunyai perbezaan tersendiri dalam urutan gen dan corak pembahagian sekatan dalam beberapa bidang genom.

Pengetahuan tentang bidang-bidang yang unik ini adalah asas untuk cap jari DNA. Setiap kaedah ini bergantung kepada penggunaan elektroforesis gel agarose untuk pemisahan serpihan DNA. Penampan TBE, yang terdiri daripada asas Tris, asid borik, dan EDTA, lazimnya digunakan untuk elektroforesis gel agarose untuk memeriksa produk DNA.

Jenis Enzim Sekatan

Terdapat tiga jenis enzim sekatan yang berlainan. Jenis I memotong DNA pada lokasi rawak sejauh 1000 atau lebih pasang base dari tapak pengiktirafan. Jenis III memotong pada kira-kira 25 pasang asas dari laman web ini. Jenis I dan III memerlukan ATP dan mungkin enzim besar dengan pelbagai sub-unit. Enzim Type II, yang kebanyakannya digunakan dalam bioteknologi, memotong DNA dalam urutan yang diiktiraf tanpa memerlukan ATP dan lebih kecil dan mudah.

Jenis II enzim sekatan dinamakan mengikut spesies bakteria yang mana mereka terpencil. Sebagai contoh, enzim EcoRI telah diasingkan dari E. coli . Kebanyakan orang ramai mengenali E. coli wabak dalam makanan. Enzim sekatan jenis

Jenis II boleh menjana dua jenis pemotongan yang berlainan bergantung kepada sama ada mereka memotong kedua-dua helai di tengah urutan pengenalan atau setiap helai lebih dekat ke satu hujung urutan pengiktirafan.

Potong bekas akan menjana "hujung tumpul" tanpa overhang nukleotida. Yang terakhir menghasilkan "lengket" atau "kohesif" berakhir kerana setiap fragmen yang dihasilkan DNA mempunyai hamparan yang memuji serpihan yang lain. Kedua-duanya berguna dalam genetik molekul untuk membuat DNA dan protein rekombinan.

Bentuk DNA ini menonjol kerana ia dihasilkan oleh ligation (ikatan bersama) dua atau lebih helai yang berbeza yang tidak asalnya dihubungkan bersama.