Cara Membuat Salin Buffered Fosfat (PBS)

PBS (fosfat buffered saline) adalah penimbal yang biasa digunakan untuk pewarnaan imunohistokimia dan biasanya digunakan dalam penyelidikan biologi. Kepekatan osmolarity dan ion penyelesaiannya sesuai dengan tubuh manusia (isotonik).

PBS adalah larutan garam berasaskan air yang mengandungi natrium hidrogen fosfat, natrium klorida dan, dalam sesetengah keadaan, kalium klorida, dan kalium dihydrogen fosfat.

Pewarnaan Imunofluoresen untuk IHC

Pewarnaan imunofluoresen adalah kaedah pewarnaan imunohistokimia pertama (IHC). Dengan asas antigen-antibodi yang mengikat tindak balas, antigen dapat dilihat menggunakan pewarna pendarfluor apabila terkandung dengan antibodi. Proses ini berlaku apabila diaktifkan oleh cahaya gelombang tertentu di bawah mikroskop pendarfluor. Immunohistochemistry merujuk kepada proses mengesan antigen (e. G., Protein) dalam sel-sel seksyen tisu dengan menggunakan prinsip antibodi yang mengikat secara khusus kepada antigen dalam tisu biologi.

Kegunaan Salin Buffered Fosfat (PBS)

Salin buffer fosfat mempunyai banyak kegunaan kerana ia adalah isotonik dan bukan toksik kepada kebanyakan sel. Ia boleh digunakan untuk mencairkan bahan dan digunakan untuk membilas bekas mengandungi sel. PBS boleh digunakan sebagai pelarut dalam kaedah untuk mengeringkan biomolekul kerana molekul air di dalamnya akan distrukturkan di sekitar bahan tersebut (protein, sebagai contoh) untuk 'dikeringkan' dan dihidupkan ke permukaan pepejal.

Filem air tipis yang mengikat bahan tersebut menghalang denaturasi atau perubahan konformasi lain. Buffer karbon boleh digunakan untuk tujuan yang sama tetapi dengan keberkesanan kurang. PBS juga boleh digunakan untuk mengambil spektrum rujukan apabila mengukur penjerapan protein dalam ellipsometry.

Penyediaan PBS

Terdapat banyak cara untuk menyediakan PBS.

Beberapa formula tidak mengandungi kalium, sementara yang lain mengandungi kalsium atau magnesium. Resipi penimbal di bawah, yang agak mudah, adalah untuk penyelesaian stok 10X PBS (0. 1M). Pilihan untuk menambah Tween juga disediakan. Seluruh proses mengambil masa kira-kira 10 minit.

Cara Membuat Saline Buffered Phosphate (PBS)

1. Berat seperti berikut: 10. 9g natrium fosfat dibasic anhidrat (Na2HPO4), 3. 2g anhydrous natrium fosfat monobasic (NaH2PO4) dan 90g natrium klorida (NaCl).
2. Larutkan semua di atas hanya di bawah air suling 1L.
3. Laraskan pH menjadi 7. 4.
4. Buat penyelesaian sehingga jumlah akhir 1L.
5. (pilihan) Untuk penyelesaian yang mengandungi 0. 5% Tween 20, tambahkan 5mL Tween 20 kepada larutan 1L.
6. Dilarutkan 10X sebelum menggunakan dan menyesuaikan semula pH jika perlu.

Tips Membuat Penampan PBS

• Simpan pada suhu bilik.
• Reagent bukan anhydrous boleh diganti tetapi anda perlu mengira semula jisim yang sesuai bagi setiap untuk menampung molekul air tambahan.

Apa yang Anda Perlu Membuat Penampan PBS

• Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
• Natrium fosfat dibasic (anhydrous)
• Natrium klorida
• Skala dan berat perikanan
• > pH probe, ditentukur, dan penyelesaian yang sesuai untuk menyesuaikan pH
• 1L kelalang volumetrik
• Tween 20 (pilihan)