Kepentingan Aktiviti Khusus dalam Isolasi Protein

Aktiviti khusus ialah istilah yang digunakan untuk mengukur kadar tindak balas enzim dengan substrat.

Aktiviti enzim spesifik (aktiviti khusus untuk pendek) adalah ukuran kesucian enzim dan dipetik sebagai unit / mg . Nilai menjadi lebih besar kerana penyediaan enzim menjadi lebih murni kerana jumlah protein (mg) biasanya kurang, tetapi kadar tindak balas tetap sama (atau mungkin meningkat disebabkan gangguan yang berkurang atau penyingkiran perencat).

Kegiatan Khusus: Mengukur Kinetik Enzim

Sebagai sedikit latar belakang, enzim adalah protein yang berfungsi sebagai pemangkin dalam mengurangkan jumlah tenaga pengaktifan untuk tindak balas yang berlaku. Tenaga pengaktifan adalah tenaga yang diperlukan untuk mendapatkan reaksi "bermula" kerana banyak tindak balas tidak berlaku dengan sangat cepat (atau berlaku sama sekali) jika mereka mungkin termodinamik.

Enzim memangkinkan tindak balas tertentu di tapak tertentu (dikenali sebagai tapak aktif) di mana reaksi mengikat dan bertindak balas untuk menghasilkan produk. Substrat mempunyai tapak aktif yang khusus hanya untuk mereka supaya tiada bahan lain mengikat atau bertindak balas di laman web yang sama. Seperti kunci dan kekunci, setiap enzim akan memangkinkan hanya satu reaksi tertentu (dengan beberapa pengecualian).

Kegiatan spesifik digunakan dalam kaedah pengasingan protein untuk menunjukkan peratusan pemurnian. Adalah penting untuk mengetahui unit ini ketika membeli enzim untuk menunjukkan betapa banyak enzim murni yang anda dapatkan.

Apabila mengukur kinetik enzim (kadar tindak balas enzim dengan substrat - atau permukaan), aktiviti tertentu ditakrifkan sebagai jumlah substrat yang ditukar enzim (reaksi catalyzed), mg protein dalam penyediaan enzim, setiap unit masa.

Contoh aktiviti spesifik adalah:

• Kegiatan spesifik enzim terpencil diukur pada 150 umoles / min / mg protein sebelum pembersihan dan 800 umoles / min / mg, selepas pembersihan.

Kegiatan spesifik merupakan ukuran penting dalam kesucian enzim. Kumpulan yang berbeza daripada enzim tulen harus mempunyai nilai yang sama dan bahkan mencairkan penyelesaian enzim berkali-kali akan mempunyai nilai aktiviti tertentu yang sama walaupun terdapat nilai aktiviti enzim yang berbeza. Ini kerana dalam mengira aktiviti tertentu, pengangka (unit / ml) dan penyebut (mg / ml) terjejas sama.

Aktiviti tertentu sangat berbeza daripada aktiviti, tetapi pengiraan aktiviti khusus masih bergantung pada nilai aktiviti. Ini bermakna nilai aktiviti tertentu yang dinyatakan juga akan bergantung kepada definisi unit enzim.

Kutipan enzim yang mempunyai nilai aktiviti tertentu yang lebih rendah daripada yang dijangkakan mungkin mengandungi molekul enzim yang telah diubah atau bercampur dengan kekotoran.

Faktor-faktor yang mempengaruhi Aktiviti Enzim

Mungkin satu enzim mungkin mempunyai nilai aktiviti yang diukur yang berbeza apabila diukur dalam makmal yang berlainan (iaitu, perbezaan sebenar dalam aktiviti diukur, tidak jelas perbezaan yang disebabkan oleh penggunaan definisi unit yang berbeza).

Cara pengujian dilakukan (kaedah ujian untuk menentukan kesucian enzim) akan mempengaruhi nilai aktiviti yang dilaporkan. Sebagai contoh, enzim biasanya lebih aktif antara suhu 37 darjah Celcius berbanding dengan 20 darjah Celsius, jadi jika ujian dilakukan pada 21 darjah celsius, nilai-nilai akan berbeza daripada pengujian yang dijalankan pada suhu 32 darjah celsius (biasanya , ujian dilakukan pada suhu antara 20-37 darjah Celcius). Oleh itu, takrif unit enzim akan lebih baik dinyatakan sebagai: 1 unit (U) ialah jumlah enzim yang memangkinkan tindak balas 1 nmol substrat seminit dalam keadaan standard.