DNA Amplifikasi Melalui Reaksi Rantai Polimerase

PCR bermaksud tindak balas rantai polimerase, teknik biologi molekular untuk menguatkan segmen DNA, dengan menghasilkan banyak salinan menggunakan enzim polimerase DNA di bawah keadaan terkawal. Sedikit segmen segmen DNA atau gen boleh diklon ke jutaan salinan, membolehkan pengesanan menggunakan pewarna dan teknik visualisasi lain.

Dikembangkan pada tahun 1983, proses PCR telah memungkinkan untuk melakukan penjujukan DNA dan mengenal pasti urutan nukleotida dalam gen individu.

Kaedah ini menggunakan berbasikal haba atau pemanasan dan penyejukan berulang reaksi untuk pencairan DNA dan replikasi. Oleh kerana PCR berterusan, DNA "baru" digunakan sebagai templat untuk replikasi dan tindak balas rantai berlaku, secara eksponen menguatkan templat DNA. Teknik PCR digunakan dalam banyak bidang bioteknologi termasuk kejuruteraan protein, kloning, forensik (sidik jari DNA), ujian bapa, diagnosis penyakit keturunan dan / atau penyakit berjangkit, dan untuk analisis sampel alam sekitar.

Dalam forensik, khususnya, PCR sangat berguna kerana ia menguatkan walaupun bukti terkecil DNA. PCR juga boleh digunakan untuk menganalisis DNA yang beribu-ribu tahun, dan teknik ini telah digunakan untuk mengenal pasti segala-galanya dari raksasa berusia 800 tahun yang berusia setahun hingga mumi dari seluruh dunia. Prosedur PCR

adalah seperti berikut:

Permulaan:

• Langkah ini hanya diperlukan untuk polimerase DNA yang memerlukan PCR panas mula. Reaksi dipanaskan antara 94 dan 96 ° C dan diadakan selama 1-9 minit.

Denaturation:

• Jika prosedur tidak memerlukan permulaan, denaturation adalah langkah pertama. Reaksi dipanaskan kepada 94-98 ° C selama 20-30 saat. Kaedah hidrogen templat DNA terganggu dan molekul DNA terkandas tunggal dicipta. Annealing:
• Suhu tindak balas adalah lebih rendah antara 50 dan 65 ° C dan dipegang selama 20-40 saat. Primer anneal kepada templat DNA terkandas tunggal. Suhu sangat penting semasa langkah ini. Sekiranya terlalu panas, primer mungkin tidak terikat. Sekiranya terlalu sejuk, primer mungkin terikat dengan sempurna. Satu ikatan yang baik dibentuk apabila urutan primer rapat dengan urutan template. Tambahan / Pemanjangan:
• Suhu semasa langkah ini berbeza-beza bergantung kepada jenis polimerase. Polimerase DNA mensintesis strand DNA yang baru. Pemanjangan akhir:
• Langkah ini dilakukan pada 70-74 ° C selama 5-15 minit selepas kitaran PCR akhir. Pegang terakhir:
• Langkah ini adalah pilihan. Suhu disimpan pada 4-15 ° C dan menyentuh reaksi. Prosedur dibahagikan kepada tiga peringkat:

Penguatan eksponen:

• Semasa setiap kitaran, produk (sekeping khusus DNA yang direplikasi) adalah dua kali ganda. Tahap tahap:
• Oleh kerana polimerase DNA kehilangan aktiviti dan menggunakan reagen, reaksi perlahan. Plateau:
• Tiada lagi produk yang terkumpul.