Cara Membuat TBE Buffer dalam 3 Langkah Mudah

TBE buffer adalah penyelesaian penampan yang terdiri daripada asas Tris, asid borik dan EDTA (atau Tris-borate-EDTA sama sekali). Penampan ini sering digunakan untuk electrophoresis gel agarosa dalam analisis produk DNA yang dihasilkan daripada amplifikasi PCR, protokol pembersihan DNA atau eksperimen pengklonan DNA.

Penampan TBE amat berguna untuk pemisahan serpihan DNA yang lebih kecil (MW <1000), seperti produk pencernaan enzim sekatan kecil.

TBE mempunyai kapasiti penyerapan yang lebih besar dan akan memberikan penyelesaian yang lebih tajam daripada penampan TAE. Penyangga TAE adalah penyelesaian yang terdiri daripada asas Tris, asid asetik dan EDTA (Tris-asetat-EDTA).

TBE pada umumnya lebih mahal daripada TAE dan menghalang ligase DNA, yang boleh menyebabkan masalah jika pembersihan DNA dan langkah ligation yang seterusnya. Dengan tiga langkah mudah yang berikut, pelajari cara membuat penyangga TBE. Ia tidak boleh mengambil lebih daripada 30 minit untuk mencipta penampan ini. Inilah caranya:

Sediakan Penyelesaian Stok EDTA

Larutan EDTA (asid etilenediamine tetraacetic) perlu disediakan lebih awal daripada masa. EDTA tidak akan pergi sepenuhnya ke dalam larutan sehingga pH diselaraskan kepada kira-kira 8. 0. Untuk larutan saham 500-mililiter 0. 5 M EDTA, timbangkan 93. 05 gram EDTA disodium garam (FW = 372. 2). Kemudian larutkan dalam 400 mililiter air deionized dan laraskan pH dengan NaOH. Selepas itu, laraskan penyelesaian kepada jumlah akhir 500 mililiter.

Sediakan Penyelesaian Stok TBE

Buat penyelesaian stok (5x) TBE dengan berat 54 g Tris base (FW = 121. 14) dan 27. 5 g asid borik (FW = 61. 83) dan membubarkan kedua-duanya dalam kira-kira 900 mililiter air berair. Kemudian tambah 20 mililiter 0. 5 M EDTA (pH 8. 0) dan laraskan larutan ke dalam jumlah akhir 1 liter.

Penyelesaian ini boleh disimpan pada suhu bilik tetapi mendakan akan membentuk penyelesaian yang lebih lama. Simpan penimbal dalam botol kaca dan buang jika mendakan telah terbentuk.

Sediakan Penyelesaian Kerja TBE

Untuk elektroforesis gel agarose, penampan TBE boleh digunakan pada kepekatan 0. 5x (1: 10 pencairan stok pekat). Larutkan larutan stok oleh 10x dalam air berair. Kepekatan larut akhir adalah 45 mM Tris-borate dan 1 mM EDTA. Penampan kini sedia untuk digunakan dalam menjalankan gel agarose.

Apa yang Anda Perlu

Untuk membuat penampan TBE, anda memerlukan hanya empat bahan. Item yang tersisa dalam senarai ini adalah peralatan. Keempat bahan yang diperlukan ialah EDTA garam disodium, asas Tris, asid borik dan air berair.

Bagi peralatan, anda memerlukan standard pH meter dan penentukuran, sesuai. Di samping itu, anda memerlukan 600-milliliter dan 1500-millilitum beakers atau flasks. Membundarkan keperluan peralatan anda adalah silinder lulus dan bar kacau dan plat stir.

Semak inventori di makmal yang akan anda gunakan untuk memastikan anda mempunyai semua yang anda perlukan sebelum anda memulakannya. Tiada yang lebih buruk daripada terpaksa berhenti di tengah-tengah menyediakan penyelesaian kerana anda telah kehabisan bahan yang sesuai.

Jika makmal anda berada di sekolah atau tapak kerja anda, periksa dengan kakitangan yang sesuai untuk melihat bahawa mereka mempunyai semua item dalam stok. Melakukannya boleh menjimatkan masa dan tenaga pada akhirnya.